如何用高效液相色譜(HPLC)進行蛋白質的純度檢測及含量測定?
首先,蛋白質的測定一般用凝膠滲透色譜
分子量測定:用HPLC測定幾個分子量已知的蛋白質,繪制分子量與調整保留時間相對應的標準曲線,然后再在相同條件下測未知蛋白的保留時間,用標準曲線對照即可的未知蛋白的分子量;
含量測定:用蛋白質標樣配制一系列不同濃度的蛋白質溶液,繪制蛋白質濃度與峰高/峰面積相關的標準曲線,再在相同條件下測位置樣品的峰高/峰面積,即可得未知樣品的濃度;
純度測定:保證待測樣品中所有組份均出峰的情況下,用目標蛋白的峰面積/峰高除以所有峰峰面積/峰高的總和即可的目標蛋白的純度.
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